زیرا بسیاری از کودکان بعد از ابتلا به خروسک در طول شب به خاطر سرفه های شدید و غیر طبیعی از خواب بیدار شده و بدخواب می شوند. بیماری خروسک معمولا چند روز پس از شروع سرماخوردگی رخ می دهد که در اغلب موارد بر اثر ویروس های مشابه رخ می دهد. برای این کار نیاز است بعد از تهیه مجوز تأسیس مقدمات کار را شروع کنید تا یک کارشناس برای بازدید مراحل کار شما فرستاده شود.
با شلیک توپ آتشین در مقابل تالار شهر پامپلونا مراسم شروع می شود. این سیستم با افزایش و کاهش دما هشدار لازم را می دهد. برای اتصال گاو آهن سوار ونیمه سوار، به تراکتور لازم است که بازوی پایینی اتصال 3 نقطه را پایین بود. لیست پرایمرهای مورد استفاده در این مطالعه از روش خلقی و همکاران (18) گرفته شد؛ توالی، طول قطعه و نیز دمای اتصال هر پرایمر درجدول1 آمده است. همچنینژن PLP بهعنوان ژن مادهزایی با طول قطعه 90 جفت بازو با شماره بانک ژنی EU581861-1 انتخاب شد. انتخاب از روی رکورد : در این مورد به سه موضوع مقدار شیر ، میزان چربی و ارزش غذایی توجه می شود .
ژن SRY بهعنوان ژن نرزایی روی کروموزوم Y با طول قطعه 89 جفت باز و با شماره بانک ژنی AJ009913-1 انتخاب شد. این ژن با طول قطعه 79 جفت باز و شماره بانک ژنی AC234910-2 مورد استفاده قرار گرفت. برای هر دام، لوله ونوجکت و سرسوزن نو مورد استفاده قرار گرفت. اگر دوره ی خشک کمتر از 40 روز باشد بافت پستان زمان کافی برای بازسازی نداشته و در نتیجه تولید شیر در شیر دهی ایده آل نخواهد بود .
به منظور آماده سازی گاو برای شیر دهی بعدی باید یک دوره ی خشک در نظر گرفته شود . اگر دوره ی خشک بیش از 70 روز باشد گاوبیش از اندازه چاق می شود درحالی که تولید شیر در شیر دهی بعد بیشتر نبوده و دشواری چاقی نیز در پی خواهد آمد . گفته می شود که بازدهی مصرف انرژی برای بافت سازی به هنگام شیر دهی بیشتر از دوره ی خشک است از این رو باید کوشش کرد که کاهش وزن گاو در هفته های پایانی شیر دهی جبران گردد . کاهش وزن ایجاد شده در آغاز دوره ی شیر دهی باید به گونه ای جبران شود که گاودر آغاز دوره ی خشک از وزن مناسبی برخوردار باشد .
حداکثر کوشش در رابطه با تداوم شیر دهی در حد امکان به عمل آید . همانطور که گفته شد گرمای بیش از حد تاثیرات نامطلوبی بر میزان تولیدات گاو ها به وجود می آورد . نتایج اثر تکنیک Swim up و افزودن سطوح مختلف لسیتین سویا (1 درصد و 2 درصد) در منی بر فراسنجه های کیفی اسپرم به حالت مایع مانند تحرک، زنده مانی، سلامت غشا و ناهنجاری و PH در جدول 3 ارائه شده است. جدول 4 نتایج اثر تکنیک Swim up و افزودن سطوح مختلف لسیتین سویا (1 و 2 درصد) به رقیقکننده تریس بر بیان ژن SRY و PLP نشان میدهد.
پژوهش حاضر بهمنظور بررسی استفاده از سطوح مختلف لسیتین سویا در رقیقکننده تریس بر کیفیت منی و نسبت جنسیت با استفاده از تکنیک real- time qPCR اجرا شد. تمامی مواد مورد استفاده در استخراج DNA از اسپرمها از شرکت Merck آلمان تهیه شدند، بهمنظور انجام واکنش real-time qPCR از کیت تجاری Amplicon (Cat. در صورت تکثیر ژنهای مورد نظر با استفاده از پرایمرهای مشخص شده، بهمنظور بررسی مقایسهای بیان ژنها از تکنیک real-time qPCR استفاده شد.
طراحی آغازگرها:پرایمرهای اختصاصی برای ژنهای مورد نظر روی کروموزوم Y و X مشخص شدند. بهمنظور تایید تکثیر اختصاصی ژنهای مورد نظر در این مطالعه با استفاده از پرایمرهای طراحیشده ابتدا واکنشPCR انجام شد. تحرک اسپرمها با استفاده از میکروسکوپ نوری، در دمای 37 درجه سانتیگراد اندازهگیری و نمونههای دارای بیشتر از 70 درصد تحرک بهعنوان منی بهینه در نظر گرفته شد. اسپرمهای با دم گرهخورده و متورم بهعنوان اسپرمهای با غشای پلاسمایی سالم در نظر گرفتهشده و اسپرمهای با دم صاف بهعنوان اسپرم با غشای آسیبدیده تعیین شدند. مصرف کلسیم باید به کمتر از 100 گرم در روز محدود شود و هم زمان فسفر کافی در اختیار گاو ها قرار گیرد ( 35 تا 40 گرم فسفر در روز برای نژادهای بزرگ) کلسیم بیشتر به ویژه اگر جیره از نظر فسفر کمبود داشته باشد احتمال بروز تب شیر را افزایش خواهد داد .
در این میان افرادی که به زبان های خارجی آشنایی دارند شما را برای صادرات محصولات شما یاری خواهند داد. با توجه به تقاضای کم مواد مغذی می توان نسبت علوفه به کنسانتره را افزایش داده و با استفاده از ترکیبات ازت دار غیر پروتئینی هزینه های غذایی را کاهش داد . محدودیت : میزان کلر ، پتاسیم و سدیم آن بالاست و برای حیوانات بعنوان یک ترکیب ملین شناخته می شود و سطوح بالای قند موجود درآن در نشخوارکنندگان می تواند باعث بروز اسیدوزگردد .
جهت تجزیه و تحلیل دادههای حاصل از real- time PCR ابتدا با استفاده از نرمافزار Step-one ABI، یک گزارش از کلیه اطلاعات موجود بهصورت فایل Word (نسخه 2013) استخراج شده و سپس به نرمافزار Excel (نسخه 2013) انتقال داده شد. مقدار 30 میکرولیتر نمونه منی با 300 میکرولیتر محیط هایپواسموتیک، مخلوط و سپس 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. آزمایش بررسی ساختار اسپرمها: برای بررسی ساختار اسپرمها 25 میکرولیتر اسپرم ذوب شده را با 50 میکرولیتر جوهر هندی مخلوط و پس از 60 ثانیه تیمار، گسترش تهیه شد (15 و 16). وضعیت ساختار اسپرمها با درشتنمایی 400 با استفاده از میکروسکوپ CX31 الیمپوس مشاهده و حداقل 200 اسپرم بررسی شد.
بدین منظور 30 میکرولیتر مخلوط رنگ ائوزین-نگروزین را بهدرون یک میکروتیوب ریخته و به بن ماری 37 درجه سانتیگراد منتقل شد سپس 20 میکرولیتر اسپرم منجمد ذوب شده به آن اضافه شده و پس از 60 ثانیه تیمار، از مخلوط حاصل شده، 10 میکرولیتر برداشته روی یک لام تمیز قرار داده گسترش تهیه و فوری خشک شد. سپس 10 میکرولیتر از مخلوط را روی لام ریخته و پس از تهیه گسترش روی لام و خشک شدن آن، در زیر میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی 400× بررسی شدند. لامها پس از رنگآمیزی، زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی 1000× ارزیابی شدند. پس از ثابت شدن اسپرمها، برای رنگآمیزی، از مخلوط رنگ گیمسا با غلظتهای 5/0، 1، 2 و 4 درصد با زمانهای رنگآمیزی 1، 2، 3، 4، 6، 8، 10 و 12 ساعت استفاده شد.
همانطور که در بخش ویژگی ها اشاره کردیم رنگ پشم بره رومانف سیاه رنگ می باشد. در همین راستا، نژاد های مختلفی وجود دارند که حاصل تلفیق رومانف با سایر نژاد ها هستند. واکنش real- time qPCR:طی این مرحله، واکنش زنجیرهای پلیمراز پیشرفته برای نمونههای DNA حاصل از اسپرماتوزوئید با 2 تکرار آزمایشی برای ژنهای PLP، SRY و PAR با استفاده از دستگاه (Step one Plusreal time PCR System، کشور آمریکا) در حجم نهایی 25 میکرولیتردر پلتهای مجزا انجام شد. نمونههای خونی به میزان 5 میلی لیتر از ورید دمی و در لولههای ونوجکت حاوی ماده ضد انعقاد EDTA (شرکت Vaccute ساخت کشور اتریش) اخذ شدند.
برای دستیابی به این هدف، تکنیک جداسازی اسپرم حامل کروموزوم X(ماده) و Y (نر) بهطور مناسب توسعه یافته است و این کار در چند کشور تجاری برای گاو استفاده میشود. اکثر روشهای ارزیابی آکروزوم از روند طولانی و پیچیدهای برخوردار هستند و گاهی نتایج مناسب و قابل قبولی نیز حاصل نمیشود (6). امروزه از تکنیکهای گوناگونی برای بررسی سلامت آکروزوم اسپرمهای تازه یا منجمد در گونههای مختلف استفاده میشود. آنالیز آماری: نتایج حاصل از آزمایشها با استفاده از روش آماری توصیفی با استفاده از نرمافزار آماری SPSS 16 ارزیابی شدند. هدف از این پژوهش استفاده از روشی ساده و مناسب برای رنگآمیزی و ارزیابی آکروزوم اسپرمهای منجمد و بررسی ارتباط بین وضعیت آکروزوم و برخی خصوصیات میکروسکوپی اسپرم مانند تحرک، میزان زنده بودن و واکنش به محلول هیپواسمول اسپرمهای منجمد گاو هلشتاین بوده است.